Hoe u TBE buffer in 3 eenvoudige stappen maakt

TBE buffer is een bufferoplossing bestaande uit Tris base, boorzuur en EDTA (of in totaal Tris-boraat-EDTA). Deze buffer wordt vaak gebruikt voor agarosegel-elektroforese bij de analyse van DNA-producten die voortvloeien uit PCR-amplificatie, DNA-zuiveringsprotocollen of DNA-kloneringsexperimenten.

TBE-buffer is bijzonder bruikbaar voor het scheiden van kleinere DNA-fragmenten (MW <1000), zoals kleine producten van restrictie-enzymverwerkingen.

TBE heeft een grotere buffercapaciteit en geeft scherper resolutie dan TAE buffer. TAE buffer is een oplossing die bestaat uit Tris base, azijnzuur en EDTA (Tris-acetaat-EDTA).

TBE is over het algemeen duurder dan TAE en DNA-ligase remt, die problemen kan veroorzaken indien daaropvolgende DNA-zuiverings- en ligatiestappen zijn bedoeld. Met de drie simpele stappen die u volgt, kunt u leren hoe u TBE-buffer maakt. Het duurt niet meer dan 30 minuten om deze buffer te maken. Zo is het:

Een voorraadoplossing van EDTA voorbereiden

Een oplossing van EDTA (ethyleendiamine tetraazijnzuur) moet vooraf worden bereid. EDTA gaat niet volledig in oplossing totdat de pH is ingesteld op ongeveer 8. 0. Voor een 500 ml voorraadoplossing van 0,5 M EDTA weeg 93,10 gram EDTA dinatriumzout (FW = 372. 2). Los het dan op in 400 ml gedeïoniseerd water en pas de pH met NaOH aan. Daarna pak de oplossing op tot een eindvolume van 500 milliliter.

Bereid een voorraadoplossing van TBE

Maak een geconcentreerde (5x) voorraadoplossing van TBE door 54 g Tris base (FW = 121. 14) en 27 te wegen. 5 g boorzuur (FW = 61, 83) en beide oplossen in ongeveer 900 milliliter gedeïoniseerd water. Voeg dan 20 milliliter 0,5 M EDTA (pH 8 0) toe en pas de oplossing aan op een eindvolume van 1 liter.

Deze oplossing kan bij kamertemperatuur worden opgeslagen, maar in een oudere oplossing wordt een neerslag gevormd. Bewaar de buffer in glazen flessen en weggooi als er een neerslag is gevormd.

Bereid een werkoplossing voor van TBE

Voor agarosegel-elektroforese kan een TBE-buffer gebruikt worden bij een concentratie van 0, 5x (1: 10 verdunning van de geconcentreerde voorraad). Verdun de voorraadoplossing met 10x in gedeïoniseerd water. Eindconcentraties van opgeloste stoffen zijn 45 mM Tris-boraat en 1 mM EDTA. De buffer is nu klaar voor gebruik bij het uitvoeren van een agarosegel.

Wat je nodig hebt

Om TBE-buffer te maken, heb je maar vier stoffen nodig. De overige items op deze lijst zijn uitrusting. De vier benodigde stoffen zijn EDTA-dinatriumzout, Tris-base, boorzuur en gedeïoniseerd water.

Wat de apparatuur betreft, heb je nodig een pH-meter en kalibratie normen, indien van toepassing. Daarnaast heb je 600 milliliter en 1500 milliliter beker of flessen nodig. Afronding van uw apparatuurbehoeften zijn afgestudeerde cilinders en roerstaafjes en roerplaten.

Controleer de voorraad in het lab dat u gebruikt om ervoor te zorgen dat u alles heeft wat u nodig heeft voordat u begint. Niets is erger dan in het midden van het oplossen van een oplossing moeten stoppen, omdat je de juiste materialen hebt gelopen.

Als uw laboratorium op school of op uw werkplaats is, raadpleeg dan het juiste personeel om te zien dat ze alle artikelen in de voorraad hebben. Daardoor bespaart u tijd en energie op het einde.